Howley. Virología ADN_7ed

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Virología. Volumen 2. Virus de ADN

URR vírica contiene elementos potenciadores constitutivos que determinan la especificidad del tejido o del tipo de célula. Estos elementos potenciadores constitutivos desempeñan un papel impor- tante en la expresión inicial de los genes víricos tras la infección y también pueden ser importantes para el tropismo tisular y el man- tenimiento de la latencia vírica. Se han identificado varios sitios de unión de factores de transcripción en las URR de múltiples PV, como AP1, SP1, Oct-1 y YY1 (revisados en la ref. 18). Además de los sitios de unión para los factores de transcripción celulares, la URR contiene sitios de unión para las proteínas E2 codificadas por el virus, así como el origen de la replicación del ADN que contiene sitios de unión para las proteínas E1 y E2. Proteínas reguladoras E2 Las proteínas E2 del papilomavirus regulan la transcripción vírica y la replicación del ADN, también favorecen el mantenimiento del plásmido a largo plazo. Las E2 se describieron por primera vez como activadoras transcripcionales 244 capaces de activar la transcripción vírica a través de elementos que responden a E2 localizadas dentro del genoma vírico. Todas las proteínas E2 contienen dos dominios conservados: un dominio de transactivación en el extremo N y un dominio en el extremo C de secuencia específica de unión al ADN y dimerización (revisados en la ref. 168). Estos dominios están unidos por una región bisagra que no está bien conservada, en longitud o composición de aminoácidos, entre los diferentes papilomavi- rus. Las proteínas E2 diméricas se unen a la secuencia consenso, ACCN 6 GGT 6,153 y regulan la transcripción desde promotores que contienen sitios de unión a E2 (revisado en la ref. 168). La estructura del dominio dimérico de unión al ADN de E2 se ha dilucidado para muchos papilomavirus y forma un pliegue de unión al ADN, un cilindro (barril) β dimérico antiparalelo no obser- vado anteriormente. 110 La estructura del dominio de transactivación en el extremo N también se ha esclarecido para varios PV (https:// pave.niaid.nih.gov/#explore/proteins/protein_structure_viewer/table_ of_available_protein_structures/). Forma una estructura donde el extremo N consiste en tres hélices alfa antiparalelas y está unido a

en http://pave.niaid.nih.gov/#explore/transcript_maps se pueden encontrar mapas de transcripción adicionales para otros PV. Los genomas oncógenos del HPV Alphapapillomavirus con- tienen tres promotores, P E (temprano), P E8 (expresa el represor de E8^E2) y P L (tardío), así como dos sitios de poliadenilación, A E (tem- prano) y A L (tardío). 126 Múltiples transcritos tempranos empalmados alternativamente se inician en P E y terminan en A E , estos expresan E6 y E7, así como otros productos génicos tempranos. El P E se activa inmediatamente después de la infección, mientras que la actividad del P E8 se retrasa varios días, lo que sugiere que la expresión del E8^E2 podría ser importante para mantener la transcripción temprana de bajo grado. 20 En las capas medias de un papiloma, el promotor tardío P L se activa, pero sigue utilizando el sitio temprano de poliadenilación. Esto genera una serie de transcritos intermedios que expresan grandes cantidades de E1, E2 y E4 para promover la amplificación del genoma vírico. 126 En etapas posteriores de la diferenciación, el promotor tardío transcribe varios ARNm que utilizan el sitio de poliadenilación tardía y codifican las proteínas L1 y L2 de la cápside. 126 En la figura 2-5 se muestran estas etapas en un papiloma cutáneo. Existe una importante diferencia en la estructura y expre- sión de los ARNm E6 y E7 codificados por los tipos de HPV Alphapapillomavirus de «alto riesgo» y «bajo riesgo». Los HPV de alto riesgo, como el HPV16 y el HPV18, utilizan un único pro- motor para sintetizar ARNm empalmados alternativamente que expresan las proteínas E6, o E6*, y E7 ( véanse las figs. 2-4 y 2-8). El ARNm que codifica E6 no es capaz de sintetizar E7, ya que no hay espacio suficiente para reiniciar la traducción. El ARNm E6* empal- mado introduce un codón de terminación que permite la reinicia- ción y traducción del ORF de E7. En cambio, los genes E6 y E7 de los HPV de bajo riesgo, como el HPV6 y el HPV11, se expresan a partir de dos promotores independientes. 241 Regulación de la transcripción (elementos cis) La URR (también conocida como «LCR» o «NCR») de las PV con- tiene elementos potenciadores que responden a factores celulares, así como a reguladores transcripcionales codificados por el virus. Cada

FIGURA 2-9 Estructura de las proteínas E2. Se muestran las estructuras de las proteínas E2 y E8^E2 del HPV. El dominio de transactiva- ción en el extremo N es de cerca de 200 aminoácidos y solo está presente en la forma completa de E2 (se muestra la estructura 1DTO 9 del HPV16). El dominio en el extremo C de unión al ADN y de dimerización es de aproximadamente 100 aminoácidos (la estructura del HPV16 se muestra en la ref. 110). Estos dominios conservados están unidos por una bisagra menos conservada de longitud y secuencia variables. SAMPLE