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Virología. Volumen 4. Fundamentos

tentes para producir seudoviriones in vivo puede mejorar la inmu nogenicidad más allá de la simple expresión de los productos génicos aislados. 77,197 Actualmente, se han producido VLP para varios pató genos víricos respiratorios. La expresión de las proteínas M1, M2, NA y HA puede formar VLP del virus de la influenza, 259 pero la HA es suficiente en presencia de la NA. 76 Estos son inmunógenos poten tes que pueden construirse para expresar Ag que pueden conferir una amplia reactividad cruzada 434 o agonistas de TLR que pueden pro porcionar propiedades adyuvantes. 473 Las seudopartículas del SARS CoV se forman por transfección de células 293 con los genes de la M (membrana) y la N (nucleocápside). 213 La proteína M del virus de la enfermedad de Newcastle (NDV, Newcastle disease virus ) es sufi ciente para producir VLP 353 que pueden apoyar la incorporación y el despliegue de la F y la G del RSV y son inmunógenas y protectoras en modelos animales. 290 Las VLP del NDV parecen ser una plata forma estable para la presentación de glucoproteínas víricas de otros virus también. 307 Los alfavirus y flavivirus también son dianas víricas potenciales para las vacunas de VLP. Por ejemplo, las seudopartícu las del virus del Nilo Occidental se forman mediante la coexpresión de la proteína precursora de membrana (prM) y la E. 199 Se produje ron VLP del virus del chikungunya que protegieron a macacos de la India de una enfermedad mortal. 3 Nuevas partículas quiméricas en las que los Ag víricos se incor poran en VLP del núcleo del HBV 45 son inmunógenas en ratones. Se pueden montar estructuras relativamente grandes sobre VLP recombinantes si se insertan de manera covalente en los bucles exte riores o se fijan mediante conjugación química en el sitio y la orien tación adecuados para permitir el acceso al Ag vacunal desplegado. Se pueden construir otras VLP quiméricas insertando Ag de vacunas experimentales en los bucles variables que miran hacia fuera, inclu yendo partículas P de los norovirus, 446 el virus del chikungunya 3 u otros, y se podrían seleccionar en función del tamaño de partícula deseado y la valencia del Ag (fig. 15-5). Otros abordajes para las vacunas La biología molecular ha sido un estímulo importante para nuevos abordajes en la fabricación de vacunas con virus vivos atenuados y también ha proporcionado vías para la producción de vacunas de subunidades y vehículos de inserción de genes que expresan Ag víri cos, especialmente mRNA ( véase e-fig. 15-6). La tecnología de MAb y de ADN y mRNA recombinantes se utiliza ahora de forma sis temática para producir grandes cantidades de Ag víricos purificados para su uso en la inmunoprofilaxis. La cromatografía de inmuno afinidad de MAb o la cromatografía de lectinas facilitan la purifi cación de Ag víricos a partir de células infectadas, mientras que la tecnología del ADN recombinante permite expresar proteínas víricas en células eucariotas de levaduras, hongos, insectos o mamí feros. El uso de estas técnicas ha dado lugar a vacunas experimentales que abarcan una amplia gama de proteínas víricas capaces de indu e pueden constr experimentales en los bucles variables que miran hacia fuera, inclu reproduction de una enfermedad mortal. Nuevas partículas quiméricas en las que los Ag víricos se incor recombinantes si se insertan de manera covalente en los bucles exte riores o se fijan mediante conjugación química en el sitio y la orien of the la proteína precursora de membrana (prM) y la E. content Las VLP del NDV parecen ser una plata potenciales para las vacunas de VLP. Por ejemplo, las seudopartícu o agonistas de TLR que pueden pro ) es sufi

llando vacunas experimentales basadas en VLP para la prevención de muchos virus, 450 como el HBV, 436 el virus del Ébola, 460 el SARS CoV-2, 500 los flavivirus virus del dengue y virus de Zika, el enterovi rus A71, el HIV y el virus de la influenza, entre otros. 20 Partículas similares a virus no envueltas La primera caracterización de las VLP sintéticas se produjo tras la observación de que las proteínas de la cápside de los picornavirus podían autoensamblarse durante la traducción in vitro del ARN vírico para producir partículas 75S a 85S. 351 Los estudios posterio res indicaron que las VLP podían formarse in vitro tras la traducción del ARN vírico de los picornavirus que carecía de la mayor parte de la región no codificante 5 ′ . 87 A continuación, se observó que la expre sión de los marcos de lectura abiertos de las proteínas de la cápside de virus no envueltos mediante un vector de baculovirus o vaccinia en células eucariotas adecuadas generaba VLP. 88,239,509 En el caso de los picornavirus, el ensamblaje de partículas requiere la expresión de todo el marco de lectura abierto para permitir el procesamiento pro teolítico de las proteínas estructurales por proteasas no estructurales codificadas por el virus. En la actualidad, se están desarrollando vacu nas contra el enterovirus 71 con tecnología de VLP. 85 El parvovirus humano B19 causa eritema infeccioso, aplasia aguda y crónica de eritrocitos y otras enfermedades. Se está desarro llando una vacuna experimental consistente en las proteínas de la cápside VP1 y VP2 del parvovirus humano B19 que forman VLP. 24 La inmunización de humanos con esta vacuna induce Ab neutralizantes que alcanzan valores equivalentes en magnitud y actividad neutrali zante a los observados tras la infección natural. 46 Las VLP antigénicas pueden producirse con facilidad para otros parvovirus humanos (boca virus) 71 y veterinarios, 395 lo que sugiere que las vacunas basadas en VLP pueden ser un abordaje adecuado para patógenos de esta familia vírica. El norovirus, un miembro prototípico de la familia de los cali civirus, también puede ser un buen candidato para una vacuna de VLP. El virus es una partícula no envuelta de 28 a 37 nm formada por una única proteína mayor de la cápside (VP1). La VP1 es una proteína con dos dominios unidos por un enlace corto. El domi nio P forma la superficie exterior de la partícula, y el dominio S forma una cubierta interior. La porción P de la VP1 puede autoen samblarse con 24 protómeros para formar una partícula de 20 nm que es inmunógena. 447 Partículas similares a virus envueltas La expresión de la nucleoproteína o de las proteínas de la matriz de algunos virus con envoltura también ha dado lugar a la producción de VLP o seudopartículas víricas. Este hallazgo se observó por pri mera vez para la proteína Gag del HIV cuando se expresó en células recombinantes infectadas por el virus vaccinia. 192 La producción de seudoviriones purificados del HIV se está desarrollando como una estrategia vacunal, 137 y la construcción de vectores que sean compe ecombinantes infectadas por el vir 2024 y la construcción de vectores que sean compe Wolters de VLP o seudopartículas víricas. Este hallazgo se observó por pri Kluwer, ta interior. La porción P de la VP1 puede autoen Inc. proteína con dos dominios unidos por un enlace corto. El domi El norovirus, un miembro prototípico de la familia de los cali El virus es una partícula no envuelta de 28 a 37 nm formada

is prohibited.

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FIGURA 15-5 Variaciones en el tamaño y la estructura de las partículas similares a virus (VLP). Las VLP presentan una amplia gama de tamaños y se muestran aquí como imágenes derivadas de la criomicroscopía electrónica. El virus de la hepatitis B (HBV), 126 el virus de la hepatitis E (HEV), 497 el virus del papiloma (PV) bovino representativo de otros virus del papiloma 488 y el virus del chikungunya (CHIKV) 3 se muestran por orden de tamaño creciente. Copyright © 2024

HBV

HEV

PV

CHIKV

22 nm

27 nm

55 nm

65 nm