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Virología. Volumen 4. Fundamentos

ten pruebas de que algunos Ab específicos contra los virus de la in fluenza y del Ébola inhiben la replicación del virus impidiendo la descapsidación primaria del virus que se asocia con la fusión de mem branas de bajo pH en el endosoma o en el paso de la descapsidación secundaria de la estructura del núcleo del virión, un paso necesario para la transcripción primaria del genoma del virus. Este principio se aprovechó para crear Ab biespecíficos «caballos de Troya» que se unen a proteínas víricas o del hospedero mediante una rama de la IgG para usar la rama antivírica de la IgG para su actividad en el endosoma. 481 Características estructurales y bioquímicas de los anticuerpos importantes para la afinidad Los Ab inducidos por la infección primaria o la vacunación en gene ral son de baja afinidad para el Ag diana. La maduración de la afi nidad de los Ab está mediada por la mutación somática de los genes que codifican los receptores de linfocitos B, que se produce en los centros germinales, sobre todo tras segundas infecciones o dosis de refuerzo de la vacuna. La HMS junto con la selección de linfoci tos B da lugar a la producción de Ab de alta afinidad en el repertorio antivírico. Es probable que el aumento de la afinidad incremente la potencia neutralizante de la mayoría de los antivirales dirigidos contra las proteínas de la superficie. Aunque la base molecular de la maduración de la afinidad durante las respuestas secundarias no se comprendía durante el desarrollo de las primeras vacunas, la mayor eficacia de los regímenes de vacunas de dosis múltiples en los ensa yos clínicos señaló el camino hacia un uso práctico de este princi pio. La mayoría de las vacunas antivíricas autorizadas se administran mediante regímenes de dosis múltiples para mejorar la calidad, la magnitud y la durabilidad de la respuesta inmunitaria. Se cree que una mayor afinidad confiere una mayor competen cia funcional a los Ab. Los trabajos en los que se emplearon Ab espe cíficos contra el HIV-1 derivados de colecciones combinatorias de Ab de expresión en bacteriófagos mostraron mejorías en la neutra lización asociadas con la maduración de la afinidad causada por las HMS. 456 La proteína de fusión (F), el principal Ag protector del RSV, tiene al menos seis sitios antigénicos principales, cada uno con una capacidad diferente como diana para la neutralización del virus. 32 Los derivados recombinantes de un mAb humanizado del RSV que contiene mutaciones aleatorias en el sitio de combinación mostraron que las mutaciones que mejoran la tasa de asociación potenciaron la neutralización y la eficacia, mientras que las que mejoran la tasa de disociación no lo hicieron, a pesar de su contribución con una mejor afinidad en el estado estacionario. 494 Se ha demostrado que las muta ciones somáticas en los Ab contra el rotavirus humano mejoran la afinidad y la función inhibidora, con mutaciones individuales en los sitios de combinación de los Ab que confieren aumentos de varios cientos de veces en la afinidad y la función. 227 Los Ab humanos más amplios y potentes contra el HIV y el virus de la influenza aislados hasta la fecha se distinguen por un número excepcional de muta ciones somáticas en las secuencias de Ab (del orden de uno de tres de los nucleótidos alterados). 503,510 La hipermutación introduce no solo mutaciones puntuales que mejoran la función, sino en algunos casos inserciones no previstas de secuencias que codifican nuevos aminoácidos que median la neutralización. 250 En el modelo de ratón del virus de la estomatitis vesicular (VSV, vesicular stomatitis virus ), los investigadores han confirmado solo aumentos modestos en las afinidades de los Ab hipermutados en comparación con los de la configuración de estirpe germinal en el transcurso de la infección y después de repetidas inyecciones de refuerzo. 226 La glucoproteína G del VSV es inusual en el sentido de que contiene un único sitio anti génico inmunodominante que induce de forma fiable Ab neutrali zantes. No obstante, se han descrito muchos casos de neutralización por Ab humanos que carecen de mutaciones somáticas (creados por recombinación mediante la reversión de mutaciones inferidas a las mediante r magnitud cia funcional a los Ab. Los trabajos en los que se emplearon Ab espe reproduction eficacia de los regímenes de vacunas de dosis múltiples en los ensa yos clínicos señaló el camino hacia un uso práctico de este princi egímenes de dosis múltiples para mejorar la calidad, la of Es probable que el aumento de la afinidad incremente the refuerzo de la vacuna. La HMS junto con la selección de linfoci content ral son de baja afinidad para el Ag diana. La maduración de la afi es de linfocitos B, que se produce en los is Los Ab inducidos por la infección primaria o la vacunación en gene prohibited.

que se incuban Ab y virus infecciosos y luego se inoculan en cultivos celulares. La infecciosidad residual se cuantifica mediante el recuento de placas, los focos infecciosos marcados con marcadores colorimé tricos o fluorescentes, la señal del virus marcador recombinante, el porcentaje de células infectadas detectadas por citometría de flujo, las mediciones de la impedancia celular que reflejan el efecto citopático u otros métodos, y se compara con las suspensiones no tratadas. Los virus son neutralizados in vitro por los Ab mediante una amplia varie dad de mecanismos. Entre las características importantes de los Ab se incluyen la afinidad y la avidez, el isotipo, la concentración, el cociente Ab/virus, la valencia, el estado de polimerización, la capacidad para unirse al receptor de poliinmunoglobulina, la capacidad para fijar el complemento, la capacidad para unirse a receptores Fc γ y la especi ficidad para la proteína del virus y el epítopo de interés. Los factores relacionados con el virus que son importantes para la neutralización incluyen aspectos generales del ciclo de replicación del virus conside rado (uso de receptores, modo de ingreso en la célula, dependencia del pH de la fusión, sitio de replicación) y características individuales de la cepa vírica específica (subgrupo antigénico y secuencia de aminoácidos de las proteínas de superficie víricas). Los factores del hospedero que influyen en el mecanismo de neutralización incluyen el tipo y origen de las células y el grado de expresión de los receptores de membrana. Los mecanismos de neutralización más potentes actúan antes de la infección de las células. En primer lugar, los viriones infecciosos libres en solución pueden ser agrupados por Ab polivalentes dirigidos con tra glucoproteínas de la superficie. 13,347 La consolidación de múlti ples viriones infecciosos en un grupo reduce el número de unidades infecciosas disponibles. En segundo lugar, los Ab pueden inhibir la fijación del virus a las células, por lo general uniéndose directamente a las proteínas de fijación del virus. Los Ab contra las proteínas de fija ción suelen ser poco neutralizantes in vitro , ya que solo logran una neutralización parcial incluso a altas concentraciones. 227 Este efecto puede deberse a la heterogeneidad del virus debido al grado variable de glucosilación que se produce durante el procesamiento postraduc cional en los numerosos sitios de glucosilación de estas proteínas o a las diversas vías de ingreso o los varios mecanismos de fijación. En tercer lugar, los virus pueden ser neutralizados después de la fijación, en la superficie celular antes del ingreso en la célula, lo que sugiere que el antisuero contiene Ab capaces de inhibir la fusión membrana célular-virus u otros pasos tempranos del ingreso del virus en la célula. Por ejemplo, los Ab contra el HPV pueden interrumpir la infección en dos fases de fijación e ingreso, la primera una asociación inicial con la membrana basal acelular que induce cambios conformaciona les en el virión y la segunda la asociación del virus con la superficie celular del queratinocito. 115 Algunos Ab neutralizantes disminuyen la infecciosidad por medio de la inhibición de la fusión virus-célula en la membrana plasmática. La actividad de inhibición de la fusión de algunos Ab se ha deducido de análisis in vitro en los que el Ab se incorpora al medio de recubrimiento tras la absorción y la penetra ción del virus, y la actividad se mide por medio de la inhibición de la fusión intercelular posterior a la infección. Además, los Ab pueden reducir la liberación de virus descendientes de las células infectadas (Ab «inhibidores de la salida»). Los Ab contra la glucoproteína de superficie neuraminidasa (NA) del virus de la influenza son un exce lente ejemplo de este tipo de inhibidores, ya que muchos mAb contra la NA inhiben la escisión enzimática del ácido siálico en la superficie celular en la región de gemación y liberación de partículas. Un Ab contra el «dominio vestigial de la esterasa» en el lado del dominio de la cabeza de la HA del virus de la influenza también tiene actividad inhibidora de la salida, probablemente al fijar el virus a la superficie celular. 22 La proteína del canal iónico M2 del virus de la influenza participa en la formación y la gemación de nuevos viriones del virus de la influenza A, y algunos Ab que reconocen el dominio extracelu lar de la M2 (M2e) inhiben el virus. Se están desarrollando vacunas antigripales universales basadas en la M2e según este modelo. 298 Exis la fusión inter la fusión intercelular posterior a la infección. A celular posterior a la infección. A superficie neuraminidasa (NA) del virus de la influenza son un exce la NA inhiben la escisión enzimática del ácido siálico en la super © 2024 incorpora al medio de recubrimiento tras la absorción y la penetra Wolters con la membrana basal acelular que induce cambios conformaciona Kluwer, Por ejemplo, los Ab contra el HPV pueden in terrumpir la infección Inc. eso o los varios mecanismos de fijación. En de glucosilación que se produce durante el procesamiento postraduc

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