Whelan. Virología. Vol 1, 7ed

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Virología. Volumen 1. Virus emergentes

celulares CD81 591 y SR-BI, 591,596 así como la internalización depen- diente de la clatrina de las partículas en el endosoma en un proceso mediado por dos receptores de entrada adicionales: las proteínas de unión estrecha claudina 1 186 y ocludina 596 ( véase fig. 8-3). Las partículas del VHC internalizadas realizan un proceso de fusión de membrana en el entorno ácido del endosoma en un proceso facili- tado por la glicoproteína de la envoltura E1, lo que da lugar a la libe- ración de genomas de VHC dentro del citoplasma de los hepatocitos ( véase fig. 8-3). 166,402,421,580,679,760 La traducción del genoma del VHC independiente del capu- chón ( cap ) se produce en el retículo endoplasmático (RE) rugoso y está dirigida por un sitio interno de entrada al ribosoma (IRES, inter- nal ribosome entry site ) de tipo III ubicado en la región no traducida (NTR, nontranslated region ) 5 ′ del genoma vírico (fig. 8-4). 550,766 La actividad del IRES depende de manera esencial del microARN 122 específico del hígado (miR-122), que recluta la proteína Argonauta 2 para estabilizar y proteger el genoma del VHC contra la actividad de la exonucleasa de la célula hospedera Xrn1 y para cambiar el equilibrio entre la traducción y la transcripción de los genomas. 331,427,467,683,816 El producto de la traducción es una poliproteína única de unos 3000 aminoácidos que es procesada cotraduccionalmente y postra- duccionalmente por el hospedero y las proteasas víricas. La escisión de la unión entre el núcleo estructural y las proteínas E1 y E2 está mediada por la peptidasa de señal de la célula hospedera, mientras que las siete proteínas no estructurales son liberadas de la polipro- teína por las proteasas víricas. Las proteasas codificadas por el VHC incluyen la NS2, que media la escisión de la unión NS2-NS3 a través de la actividad de la cisteína proteasa C-terminal, y la NS3, con su cofactor NS4A anclado a la membrana, que escinde los sitios de unión restantes entre las proteínas NS a través de la actividad de serina-proteasa ( véase fig. 8-4). 45,122 Las proteínas NS liberadas se organizan en complejos de replicasa en una red membranosa de vesículas de doble mem- brana (VDM) de 150 nm que derivan del retículo endoplasmático de los hepatocitos. 642 Esta estructura concentra los factores celulares y víricos necesarios para la replicación y puede secuestrar proteínas del VHC y genomas de sensores innatos del hospedero ( véase la sección FIGURA 8-3 Ciclo de vida del VHC. La unión inicial y la interna- lización ( 1 ) probablemente impliquen glicosaminoglicanos ( GAG ) y receptores de lipoproteínas de baja densidad ( LDLR, low-density lipoprotein receptors ), que pueden interactuar con las proteínas de envoltura vírica o con las lipoproteínas asociadas con viriones. El ingreso depende directamente de la unión de E2 con la tetraspanina CD81, así como de las interacciones con el receptor depurador o sca- venger BI ( SR-BI ) y las proteínas de unión ocluyente claudina 1 y oclu- dina ( OCLN ). El genoma vírico se libera de los endosomas tardíos ( 2 ) de manera dependiente del pH, seguido de la síntesis de poliproteí- nas dependientes del sitio interno de entrada al ribosoma ( IRES ) ( 3 ) con escisiones iniciales entre las proteínas estructurales mediadas por la señalasa y la peptidasa del péptido de señal seguidas por la escisión de la unión NS2-NS3 por la cisteína-proteasa NS2-NS3; las uniones restantes son escindidas por la serina-proteasa NS3-NS4A. La proteína NS4B recluta y reorganiza las membranas del retículo endo- plasmático ( RE ) ( 4 ) para formar una red membranosa , el principal sitio de replicación vírica. La síntesis de ARN de cadena negativa y su subsecuente cadena positiva resulta afectada por la ARN-polimerasa dependiente de ARN ( RdRp ), NS4B (5), y depende de MiR-122 y ciclofilina B, así como de elementos estructurales conservados en los extremos 5 ′ y 3 ′ del genoma. La proteína del núcleo se asocia con gotas de lípidos ( GL ) en la vía de ensamblaje de lipoproteínas ( 6 ), vinculadas con NS5A y otros miembros del complejo de replicación por interacción con NS2. La viroporina p7 es necesaria para la pro- ducción de partículas víricas estables recubiertas con E1 y E2, que se pliegan de manera cooperativa y son glicosiladas de forma consis- tente con el procesamiento de RE pero no con el de Golgi.

VHG-B

HVR-rn1

HVR-rn2

VHNP

98

VHG-C

100

VHC gt3

100

0.05

100

VHC gt2

100

VHC gt5

VHC gt4

VHC gt1

VHC gt6

FIGURA 8-2 Relaciones evolutivas y distancias genéticas entre el VHC, el virus de la hepatitis no primate (VHNP), el virus de la hepatitis G-B (VHG-B), el hepacivirus de la rata (HVR) y el VHG-C. Se alinearon un total de 629 posiciones de aminoácidos de la proteína NS3 y se usaron para el análisis filogenético comparativo con MEGA7 (1). La historia evolutiva se infirió usando el método de unión de vecinos. Se muestra el árbol óptimo con la suma de la longitud de la rama = 2.07891938. El árbol está dibujado a escala, con longitudes de rama en las mismas unidades que las distancias evolutivas utilizadas para inferir el árbol filogenético. Las distancias evolutivas se calcularon usando el método de la distancia p y están en las unidades del número de diferencias de aminoácidos por sitio. La variación de la velocidad entre los sitios se modeló con una distri- bución gamma (parámetro de forma = 1). El análisis incluyó 12 secuencias de aminoácidos. Se eliminaron todas las posiciones ambiguas para cada par de secuencias (amablemente proporcionado por el Dr. Amit Kapoor).

1

GAG, LDL-R

SR-BI

CD81

Claudina

pH

2

OCLN

PPP

E1 E2 p7NS2

Helicasa Prot NS3

4ANS4B NS5A

NS5B

Núcleo

GL 6

3

4

5

NS4B

?

+miR-122 +cicflofilina(s) A/B